تولید موش کلون شده با استفاده از روش انتقال هسته سلول سوماتیک

شبیه سازی پستانداران برای چندین سال با استفاده از روش شکافتگی جنینی در مراحل اولیه و یا انتقال هسته سلول های جنینی به داخل اووسیت، با موفقیت انجام شده است. در حال حاضر شبیه سازی با استفاده سلول های سوماتیک بالغ نیز امکان پذیر است. اگرچه تا حالا 15 سال از تولد اولین پستاندار کلون شده با استفاده از انتقال هسته سلول سوماتیک می گذرد، ولی میزان تولد زاده های زنده در کلونینگ بدون توجه به نوع سلول و نوع گونه حیوانی، بسیار پایین می باشد. با این حال این تکنیک یک ابزار بالقوه مهم برای تحقیقات آتی در زیست شناسی پایه می باشد. در این پژوهش با تزریق مستقیم هسته سلول دهنده به تخمک های فاقد هسته موش، با استفاده از دستگاه piezo-actuated micromanipulator، اقدام به شبیه سازی موش شد. جهت سوپراوولاسیون به موش ماده نژاد b6d2f1تزریق متوالی pmsg وhcg انجام شد. بعد از 15-14 ساعت از تزریق hcg مجموعه اووسیت – کومولوس از اویداکت موش جمع آوری شده و در محیط m2+hy قرار داده شد. بعد از هسته گیری اووسیت هایی که در مرحله متافاز ii قرار داشتند، هسته سلول دهنده (سلول های کومولوس) به این اووسیت ها تزریق شد. به دنبال تزریق هسته، اووسیت ها در محیط فعال سازی قرار داده شدند و تحت شرایط 37 درجه سانتی گراد و 5% co2 انکوبه شدند. جنین هایی که در مرحله دو سلولی بودند به اویداکت موش حامله کاذب انتفال داده شدند. 19 روز پس از انتقال جنین ها، جنین های زنده حاصل شدند. این جنین ها به قفس موش دایه که همزمان با تولد جنین های شبیه سازی شده زایمان کرده بود، جهت تغذیه بهتر انتقال داده شدند. از آنجایی که منشا جداسازی سلول های کومولوس موش های سیاه b6d2f1 بود و موش های کلون شده هم دارای رنگ سیاه بودند، این نتایج بیانگر درست بودن مراحل مختلف آزمایش های انجام شده می باشد.